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                      One Step RT-PCR Kit

                      貨號:MM071
                      包裝:50 rxn (50 μl/rxn)
                      價格:800
                      儲存:-20 ℃

                      詳細描述

                       

                      One Step RT-PCR Kit專為以RNA為模板的終點法PCR檢測而設計。使用基因特異引物(GSP),RNAcDNAPCR反應操作在同一反應體系中連續進行,不需要額外的開管、移液操作,大大簡化了步驟,提高了檢測通量,并降低了污染的風險。

                      整合Super M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase以及HotStart Taq DNA Polymerase的優越性能,配合經過優化的緩沖體系,One Step RT-PCR Kit的檢測靈敏度可達到1pgRNA。Super M-MLVH-)是在M-MLV (H-) Reverse Transcriptase序列基礎之上經過多點突變得到的高效逆轉錄酶,能夠增強與模板的親和力,可獲得更多全長的cDNA,并可檢測到低至1 pg的總RNA;HotStart Taq  DNA  Polymerase是經過化學修飾的Taq DNA Polymerase,常溫下封閉Taq酶的活性,可以非常有效地抑制引物的非特異性退火及引物二聚體引起的非特異性擴增。

                      注:5× One Step RT-PCR Mix包含優化的緩沖體系和dNTP;One Step RT-PCR Enzyme Mix包含比例優化的Super M-MLV、RNase inhibitor以及HotStart Taq DNA Polymerase。5XPCR Enhancer可以顯著增強PCR產物的特異性和產量。

                      質量控制       

                      1. 所有組分經檢測均無核酸外切酶,核酸內切酶,RNase殘留。

                      2. 功能檢測1:以1 μl HeLa cell total RNA為模板,以特異引物進行One Step RT-PCR擴增UTRN基因。瓊脂糖凝膠電泳,EB染色,可見8.3kb目的條帶。

                      3. 功能檢測2:以1 pg HeLa cell total RNA為模板,以特異引物進行One Step RT-PCR擴增GAPDH基因。瓊脂糖凝膠電泳,EB染色,可見有單一的493bp條帶。

                      注意事項

                      所有操作最好在冰上進行。使用無Rnase的離心管、槍頭和H2O。高質量的完整的RNA對于獲得高質量的cDNA是至關重要的。

                      一般情況下,建議50合成cDNA,對于具有復雜二級結構或高GC含量的模板,可將cDNA合成溫度提高至55。

                      ● Enzyme Mix已包含RNase inhibitor,用于抵抗環境和體系中可能存在的痕量RNase。

                      ● 5×One Step RT-PCR Buffer包含優化的緩沖體系和dNTP,無需再添加dNTP。-20 凍存溶解后如果有不溶物,請室溫或者37℃放置10分鐘溶解后混勻使用。

                      本制品提供5XPCR Enhancer,在絕大部分RT-PCR反應體系中,5XPCR Enhancer都可以顯著增強PCR產物的特異性和產量,只有在極少數的RT-PCR反應體系中,5XPCR Enhancer會抑制反應。

                      One Step RT-PCR是針對基因特異引物設計,對于通用引物如oligo(dT)不適用。建議RT-PCR反應時,上下游引物(Primer F/R)終濃度在0.6μM左右調整。

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