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                      第一鏈 cDNA Synthesis Kit

                      貨號:MM061
                      包裝:50rxn
                      價格:500
                      儲存:-20 ℃

                      詳細描述

                       

                      Enzyme Mix 包含Super M-MLVSuper RNase inhibitor,Super M-MLV是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基礎上經過多點突變得到的全新逆轉錄酶,在 50下活性最高,且可耐受高達60的反應溫度,可用于具有二級結構的RNA模板的逆轉錄。Super M-MLV能夠增強與模板的親和力,可獲得更多全長的cDNA,并可檢測到低至1 pg的總RNA,特別適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉錄。此外,Super M-MLV的錯配率也比M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase有所降低,提高了克隆的保真度。第一鏈cDNA合成試劑盒包含合成高質量第一鏈cDNA所需的所有成分??筛鶕枰?,選擇Oligo (dT)15、Random hexamers或基因特異引物作為逆轉錄引物。

                      質量控制       

                      所有組分經檢測均無核酸外切酶,核酸內切酶,RNase殘留。

                      功能檢測1:以500 ng Hela cell total RNA為模板,Oligo (dT)18為引物,50反應45分鐘。取1/10 cDNA產物進行PCR擴增DNCH基因。瓊脂糖凝膠電泳,EB染色,可見有單一的5.6 kb條帶。

                      功能檢測2:以100 pg Hela cell total RNA為模板,Oligo (dT)18為引物,50反應30分鐘。取1/10 cDNA產物進行PCR擴增β-actin基因。瓊脂糖凝膠電泳,EB染色,可見有單一的550 bp條帶。取1/10 cDNA產物進行PCR擴增β-actin基因。瓊脂糖凝膠電泳,EB染色,可見有單一的550 bp條帶。

                      注意事項

                      所有操作最好在冰上進行。使用無Rnase的離心管、槍頭和H2O。

                      對于具有復雜二級結構或高GC含量的模板,可將cDNA第一鏈合成溫度提高至55。

                      RNA,高質量的完整的RNA對于獲得高質量的cDNA是至關重要的。

                      RT Enzyme Mix已包含RNase inhibitor,用于抵抗環境和體系中可能存在的痕量RNase。

                      ● 5 × RT Buffer-20 凍存溶解后如果有不溶物,請室溫或者37℃放置10分鐘溶解后混勻使用。

                      第一鏈cDNA產物可直接用作PCR反應的模板。建議作為模板的cDNA產物的體積不超過PCR反應體積的1/10。

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