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                      全血基因組DNA快速提取試劑盒

                      貨號:DK051
                      包裝:50 T
                      價格:375
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                      詳細描述

                       

                      本試劑盒采用胍鹽裂解法裂解細胞,在高鹽狀態下通過離心吸附柱特異性地結合DNA,通過漂洗液將雜質和其它成分去除,最后通過低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將基因組DNA從纖維素膜上洗脫。我公司采用進口離心吸附柱,能高效、專一的吸附DNA。使用本試劑盒提取的基因組DNA可適用于各種常規操作。

                      【使用說明】

                      1.      裂解液LB緩沖液IR在低溫條件下會產生沉淀,使用前放入37水浴幫助溶解,冷卻到室溫后使用。

                      2.      所有離心步驟均為使用臺式離心機室溫下進行離心,速度為12,000rpm (~13,400×g)。

                      【提取步驟】

                      1.      全血裂解:

                      1)有核紅細胞全血(含抗凝劑),取1-5μl加至2ml 離心管中,加PBS(自備)補足至100μl,混勻后加300μl裂解液LB,渦旋10秒混勻,室溫靜置10分鐘。向裂解液中加入100μl異丙醇(自備),立即渦旋5秒混勻。(此時可能出現絮狀沉淀)

                      v  有核紅細胞全血基因組DNA含量高,提取時取血量不宜超過10μl。

                      2無核紅細胞全血(含抗凝劑),取50μl-100μl加至2ml EP管中,加紅細胞裂解液 (客戶自備,也可以用20mM Tris-HCl, pH7.4裂解紅細胞),混勻后室溫放置5分鐘,12000 rpm離心20秒,棄上清留沉淀(白色)。加100μl PBS重懸之后,加300μl裂解液LB,渦旋10秒混勻,室溫靜置

                      10分鐘。向裂解液中加入100μl異丙醇,立即渦旋5秒混勻。(此時可能出現絮狀沉淀)

                      v  盡量將紅細胞除盡,如果加紅細胞裂解液后離心得到沉淀偏紅色,建議加500μl PBS重懸后,12000 rpm離心20秒,棄上清留沉淀(白色)。

                      v  加異丙醇之后渦旋時間不能太長,否則易造成基因組DNA斷裂。

                      2.     將上一步溶液加到吸附柱C中(包括可能的沉淀),12000 rpm離心1分鐘。

                      3.     棄廢液,向吸附柱中加500μl緩沖液 IR,12000 rpm離心30秒。

                      4.     向吸附柱中加入600μl漂洗液 WB(請先檢查是否已加入無水乙醇!,12,000rpm 離心30,棄掉廢液。

                      5.     加入400μl 漂洗液WB, 12,000rpm離心30秒,棄掉廢液。

                      6.     將吸附柱放回空收集管中,12,000rpm離心60,盡量除去漂洗液。

                      v  漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶反應(酶切、PCR等)實驗。也可以將吸附柱開蓋,置于室溫放置數分鐘,以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。

                      7.     小心取出吸附柱 ,放入一個滅菌的離心管中,在吸附膜的中間部位加 100μl 洗脫緩沖液EB-1或者EB-2(洗脫緩沖液事先在60-70浴中加熱效果更好),室溫放置 2 分鐘,12,000rpm離心1分鐘。如果需要較多量DNA,可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,再離心1分鐘。

                      v  洗脫體積越大, 洗脫效率越高。如果需要DNA濃度較高, 可以適當減少洗脫體積,但是最小體積不應少于 50μl。

                      本試劑盒提供兩種洗脫液EBTE。EB10mM Tris-HCl ,pH8.0),不含EDTA,不影響下游酶切、連接等反應。如質粒DNA需長期保存,可以用TE10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0)洗脫,EDTA可能影響下游酶切反應。
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