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                      質粒小提試劑盒

                      貨號:DK011
                      包裝:50 T
                      價格:180
                      儲存:RT

                      詳細描述

                      本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,在高鹽狀態下通過離心吸附柱特異性地結合溶液中的DNA,通過漂洗液將雜質和其它成分去除,最后通過低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將高純度質粒DNA從纖維素膜上洗脫。我公司采用進口離心吸附柱,能高效、專一的吸附DNA。使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于轉染多種細胞及各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、連接等實驗。

                       

                      【使用說明】

                       

                      溶液 P2SDS,在低溫條件下會產生沉淀,使用前放入37℃水浴幫助溶解,冷卻到室溫后使用。

                      每次使用前將溶液 P3 放在冰上預冷。

                      所有離心步驟均為使用臺式離心機室溫下進行離心,速度為12,000rpm (~13,400×g)。

                       

                      【提取步驟】

                       

                       1、取2-4ml 過夜培養的菌液,12,000rpm 離心30秒,盡可能倒干或吸除上清,收集菌體。

                      選擇適量體積菌液,菌體過多會影響裂解致使提取的質粒純度降低。培養基盡量除盡,殘留的培養基會降低質粒提取效率。

                      2、加250μl溶液P1重懸菌體,劇烈渦旋振蕩至菌體完全散開。

                      *未徹底混勻的菌塊,會影響細菌裂解,導致提取量和純度偏低。

                      3、加250μl的溶液P2(注意溶液P2是否有沉淀),上下翻轉5-8次使溶液充分混勻,室溫放置3-4分鐘。此時菌液應變得清亮、粘稠。

                      *溫和地上下翻轉充分混合,不要劇烈震蕩,以免基因組 DNA斷裂!

                      *如菌體過多,加入溶液P2后不清亮,可以適當補加P2(后續P3溶液也要按比例多加)。溶液P2反應時間不要超過5分鐘!以免質粒受到破壞。

                      4、加 350μl 溶液P3,立即溫和地上下翻轉5-8次,充分混勻,此時會出現白色絮狀物質。冰上靜置 3-5 分鐘,12,000rpm 離心10分鐘。

                      *加入溶液P3后應該立即充分混勻以免產生SDS的局部沉淀。

                      5、小心吸取上清,加入吸附柱 B 中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm 離心30秒,倒掉收集管中的廢液。

                      *吸取上清時要小心操作,寧可少吸一些體積也不能吸出沉淀,以免污染質粒。

                      6、加入600μl漂洗液WB(請先檢查是否已加入無水乙醇!),12,000rpm 離心30秒,棄掉廢液。

                      7、加入400μl 漂洗液WB, 12,000rpm離心30秒,棄掉廢液。

                      8、將吸附柱放回空收集管中,12,000rpm離心60秒,盡量除去漂洗液。

                      *漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶反應(酶切、PCR等)實驗。也可以將吸附柱開蓋,置于室溫放置數分鐘,以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。

                      9、小心取出吸附柱 ,放入一個滅菌的離心管中,在吸附膜的中間部位加 100μl 洗脫緩沖液EB-1或者EB-2(洗脫緩沖液事先在60-70℃水浴中加熱效果更好),室溫放置 2 分鐘,12,000rpm離心1分鐘。如果需要較多量質粒,可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,再離心1分鐘。

                      *洗脫體積越大洗脫效率越高。如果需要質粒濃度較高可以適當減少洗脫體積,但是最小體積不應少于 50μl。

                      *本試劑盒提供兩種洗脫液EBTE。EB10mM Tris-HCl ,pH8.0),不含EDTA,不影響下游酶切、連接等反應。如質粒DNA需長期保存,可以用TE10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0)洗脫,EDTA可能影響下游酶切反應。

                       

                       


                       

                       

                       

                       

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