• <b id="wbes9"></b>
        1. <b id="wbes9"><small id="wbes9"><ol id="wbes9"></ol></small></b>
            1. <b id="wbes9"><address id="wbes9"><ol id="wbes9"></ol></address></b>

            2. <u id="wbes9"></u>
            3. 
              
              <b id="wbes9"><address id="wbes9"><kbd id="wbes9"></kbd></address></b>

            4. <u id="wbes9"><small id="wbes9"></small></u>
                    1. 科研產品您現在的位置 :首頁 - 科研產品

                      真菌基因組DNA提取試劑盒

                      貨號:DK032
                      包裝:50T
                      價格:375
                      儲存:RT

                      詳細描述

                      本試劑盒采用改進的CTAB抽提液能高效裂解細胞并滅活細胞內核酸酶,經過氯仿抽提后,真菌基因組DNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于纖維素膜上,再通過一系列快速的漂洗、離心的步驟,進一步將蛋白等雜質去除,最后低鹽的洗脫緩沖液將高純度基因組DNA從纖維素膜上洗脫下來。我公司采用進口吸附柱,能高效、專一的吸附DNA。使用本試劑盒提取的DNA可適用于各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、連接等實驗。

                       

                      【提取步驟】

                      1.     取適量真菌組織(新鮮組織 100 mg 或干重組織 50 mg)在研缽中加入液氮充分碾磨成細粉。轉移細粉到一個 2.0ml 離心管,不要解凍,加入 800μl 65預熱的裂解液FPL,劇烈渦旋振蕩充分混勻。

                      v  如果沒有液氮,可以將組織剪成細塊,加入800μl 裂解液FPL后迅速研磨,直至無可見塊狀物,將研磨器中溶液和組織轉移到一個 2.0ml 離心管中,劇烈渦旋振蕩充分混勻。如果依然有大量難以裂解的團塊,應該離心去除,取上清再繼續以下操作。

                      2.     向溶液中加入約5μl RNase A (10 mg/ml),充分混勻室溫靜置3分鐘。

                      3.     65水浴 10-60 分鐘, 在水浴過程中顛倒離心管以混合樣品2-3次。

                      v  水浴時間視組織材料而定,新鮮組織65水浴 10分鐘即可,其余難裂解的組織可以適當延時。

                      4.     加入 800μl氯仿/異戊醇(體積比 241)(自備),短暫渦旋振蕩充分混勻,12,000rpm 離心10分鐘。

                      v  振蕩幅度過大,時間過長都會打斷基因組DNA,造成DNA純度和產量降低。

                      5.     小心吸取上清到一個新的 1.5ml 離心管, 注意不要吸到界面物質,寧缺毋濫。

                      6.     估算上清量, 加入1/4體積的異丙醇, 立即顛倒混勻數次。

                      v  此步驟中充分混勻非常重要,混勻不充分嚴重降低產量。

                      7.     將上一步混合物(包括可能有的沉淀)加入一個吸附柱 C 中,(吸附柱放入收集管中)12,000 rpm 離心60 秒,倒掉收集管中的廢液。

                      8.     加入600μl漂洗液WB(請先檢查是否已加入無水乙醇!,12,000rpm 離心30,棄掉廢液。

                      9.     加入400μl 漂洗液WB, 12,000rpm離心30秒,棄掉廢液。

                      10.  將吸附柱放回空收集管中,12,000rpm離心60,盡量除去漂洗液。

                      v  漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶反應(酶切、PCR等)實驗。也可以將吸附柱開蓋,置于室溫放置數分鐘,以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。

                      11.  小心取出吸附柱 ,放入一個滅菌的離心管中,在吸附膜的中間部位加 50μl 洗脫緩沖液EB或者TE(洗脫緩沖液事先在60-70浴中加熱效果更好),室溫放置 2 分鐘,12,000rpm離心1分鐘。如果需要較多量DNA,可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,再離心1分鐘。

                      v  洗脫體積越大, 洗脫效率越高。如果需要DNA濃度較高, 可以適當減少洗脫體積,但是最小體積不少于 30μl。

                      v  本試劑盒提供兩種洗脫液EBTE。EB10mM Tris-HCl ,pH8.0),不含EDTA,不影響下游酶切、連接等反應。如DNA需長期保存,可以用TE10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0)洗脫,EDTA可能影響下游酶切反應。

                       

                      首頁 | 產品 | 服務 | 合作 | 資源 Copyright © 2014 江蘇溥博生物科技有限公司 版權所有 蘇ICP備14044946號-1 蘇公網安備 32031202000395號

                      蘇-公網安備 32031202000395號


                      天天日天天干,天天爱天天做天天爽,超碰国产人人做人人爽,天天日影院,天天舔--,天天插,天天狠,天天干